发布时间:2024-01-22 15:11:04
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2结果
2.1临床医学专业免费定向学生报考原因结果显示临床医学专业免费定向学生报考原因由高到低依次为老师或家长推荐(59人,31.89%)、个人志愿(55人,29.73%)、经济原因(53人,28.65%)和任意选取(18人,9.73%)。
2.2临床医学免费定向学生专业认同情况为了解临床医学免费定向学生专业认同的基本情况,对参与本次调查的185名大学生在专业认同及其4个维度上进行统计,其中,最高为5分,最低为1分,中等临界值为3分。结果显示,临床医学免费定向学生专业认同总平均分为(3.52±0.53)分,高于中等临界值(3分),各维度得分由高到低依次为行为性(3.75±0.68)分、情感性(3.62±0.81)分、认知性(3.35±0.62)分和适切性(3.16±0.716)分。2.3临床医学免费定向学生专业认同的性别比较临床医学免费定向学生专业认同男生得分为(3.57±0.54)分,高于女生得分(3.48±0.52)分,但差异无统计学意义(F=0.215,P=0.232)。2.4临床医学免费定向学生专业认同的年级比较不同年级的临床医学免费定向学生专业认同差异无统计学意义(F=1.323,P=0.269),但随着年级的变化而不同,专业认同水平得分由高到低依次为大学一年级(3.61±0.49)分、大学三年级(3.52±0.53)分、大学二年级(3.42±0.57)分,其中大学一年级学生专业认同水平最高,大学二年级学生专业认同水平最低。
3讨论
教书育人是学校教育的基本职能,职业道德教育为免费医学定向生的健康成长保驾护航。免费医学定向生大学毕业后将直接踏入基层、服务人民,他们的存在和发展就必须要符合社会的客观要求,有利于社会发展的职业道德教育是其至关重要的一项。培养出富有职业道德的医学生将是社会发展的必然趋势。
1.2加强免费医学定向生职业道德教育是构建和谐医患关系的有力保障
现如今,我国医疗卫生事业进入新的瓶颈期。长期以来,国内都存在“患者多、医生少”的状况,远远满足不了广大人民群众的看病需求。然而,部分医德修养低、看重名利的基层医疗卫生人员难以抗拒金钱的诱惑,逐渐显现出不少的腐败现象,如收受红包、滥用药物、小病大治等,导致医疗纠纷越来越严重,医患关系日益紧张。
1.3加强免费医学定向生职业道德教育是其自身成长的发展需要
随着医学科学的不断进步,现代医学模式已由单纯的生物医学模式转为生物-心理-社会医学模式,该模式把人作为自然属性和社会属性的统一体,认为影响患者健康状况的既有生物因素又有社会和心理因素,医生的服务不仅要医治患者生理上的病痛,还应承担维护和促进患者健康心理状态及构建和谐的医患关系等,这就要求基层医疗工作者不仅要有精湛的医疗技术,还要有全面的人文科学、心理学、法学等知识。免费医学定向生作为基层群众健康的“守门人”,他们除了要学专习业知识和掌握技能操作外,还要树立良好的职业价值追求,不断提升自身的职业素养,努力做到敬岗爱业,才能适应社会主义新农村建设和医疗卫生体制改革对基层全科医生的要求。
2加强免费医学定向生职业道德教育的途径
2.1加强临床实践
医学道德理论内容的理解只是起点,体验和实践才是深入内核的根本途径。让免费医学定向生早期参加一系列的有关临床实践活动是培养良好的职业道德的一条必经之路。临床实践不仅能够把医学理论运用于实际操作,也是免费医学定向生接触社会、服务群众的途径,此时将形成职业道德的初意识。因此,可通过开展临床实践活动,应用多种的教育形式与手段,如:开展大学生暑期“三下乡”活动、大学生暑期临床见习活动、体验急救中心志愿者的一天等,使医学生的职业道德在社会实践中得到培养,敬业精神得到展现,职业道德得到升华,引导免费医学定向生走向正确的道德之路。
2.2加强师德建设
韩愈《师说》提出:“师者,所以传道授业解惑也。”教师不止传授知识,更为重要的是“传道”,要教育学生如何做人,重点在于如何担当起自己的职责。“身教胜于言传”,教师在教学中要通过自己高尚的人格品质感染学生,潜移默化地起到职业道德教育的作用。随着市场经济的不断深化,社会上的一些不良思潮也会趁机涌进校园,冲击高校部分教师的思想。因此,加强教师职业素质教育是所有高校培养学生职业道德的一项重要内容。要建立一支专业强、职业素养高、道德品质良好的教师队伍,让教师通过自己的正确言行激励、引导医学生的健康成长。
2.3开展自我教育
进入临床工作以后,医学生提前接触社会。除了以上所述各方面之外,还应注重免费医学定向生的自律性培养。通过自我道德能力的培养,使免费医学定向生摆正自身的高校角色的位置,即教育者和被教育者的双面角色,完成由“要我”到“我要”的转变。第一,实施以人文教育为基础的全程医德教育。将医学人文教育课程的内容整合到医疗实践中去,尽可能达到医学与人文教育课程理想的一体化。第二,开设《医学生职业道德教育课》,应当注重实践教育,形式可不固定于课堂,选择报告、讲座、演讲、辩论、参观访问等形式,也可借媒体传播职业道德,可通过宣传栏、广播、电视、网络等媒体宣传,潜意识里无形地引导免费医学定向生的职业道德观往好的发展。第三,开展免费医学定向生的职业道德现状调查,可通过同学们反馈的信息,对症处理,向正面引导。第四,深入临床工作,利用学校安排的医院见习、实习,写出自身的心得体会,学生将会对这段时期所学有深入的反思。
Detection of cystatin C in the patients with iarge superficial burn
SHU Ling,ZHANG Yan.
Department of Laboratory,NO.4 People’s Hospital Medical Dalian LiaoNing 116033,China
【Abstract】 Objective To probe into the changes of Cystatin C in the patients with large superficial burn. Methods Cystatin C,Cr in the serum ofpatients with large superficial burn were detected. Results Compared with the natural, the levels of Cystatin C significantly rose (P
【Key words】 Large superficial burn;Cr;CysC
胱抑素C是一种低分子蛋白质,能自由通过肾小球滤过膜。人机体所有的有核细胞均以恒定的速率产生胱抑素C,它在血清中的浓度与肾小球滤过率(glomerular filtration rate,GFR)密切相关。近年来对其研究的领域越来越广泛,本研究旨在讨论其与大面积烧伤患者之间的关系。
1 资料与方法
1.1 对象 试验组:大面积烧伤患者24 例,其中男15例,女 9例,年龄19~45岁,全部患者均为本院烧伤科住院患者,病理诊断为全身烧伤面积累及75%或以上。 对照组:本院健康体检合格人员24例,均排除肾脏功能异常。
1.2 方法 采空腹静脉血3 ml,离心,检测。
1.3 仪器 日本奥林巴斯AU400全自动生化分析仪
1.4 试剂 Cr试剂为日本和光提供;CysC为北京利德曼提供。
1.5 统计学方法 检测结果以表格形式表达,试验组和对照组采用方差分析。
2 结果
检测结果见表1和表2。
3 讨论
从实验结果看,血清CysC能更明显的反映患者肾功能的变化,且入院10 d时血清CysC明显升高(P
血清肌酐(Cr)是临床最常用的检测肾功能的指标,它检测方法简便,费用小,检测时间短。但它的浓度受年龄、性别、身体肌肉的组成以及饮食等因素的影响而变化;还有一些药物和内源性物质也会干扰Cr的检测结果。虽然肾小管不重吸收Cr,但它能分泌少量Cr,这也会影响Cr对肾小球滤过率的估计。随着肾功能的变化,只有当GFR降低到50%的时候血浆中的Cr含量才开始增高。
胱抑素C是80年代中期瑞典的Simonsen等科学家经研究发现的[1]。其含量较稳定,不受年龄、性别、肌肉量等因素的影响,而且也不受大多数药物以及炎性反应的影响。血清中的CysC含量一般在1岁以后就达到成人水平[2]。CysC分子量大于Cr,且带正电荷,更容易反映肾小球滤过膜通透性的早期变化,可以在肾小球滤过率轻微降低时升高。研究资料已表明,CysC较Cr有更高的灵敏性和特异性,是反映GFR较理想的内源性标志物[3]。
大面积烧伤患者,由于坏死组织产生肌球蛋白尿,和溶血后的血红蛋白尿能损伤肾小管,脱水及血容量不足能加重肾脏功能的负担,更容易产生肾功能异常,甚至急性肾功能衰竭,因此监测肾功能尤其必要。胱抑素C做为肾功能的一项指标,持续动态观察对于临床更有意义。
参考文献
[1]
免疫胶体金标记技术做为免疫检测等领域的一项重要检测手段, 最大特点是操作方便[1, 2]。作者采用胶体金免疫层析法对HBsAg的分析性能进行评价, 比较该方法对乙肝病毒表面抗原的检测质量。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 选取市临床检验中心日常检测标本及本院2009年1月~2013年12月门诊和住院患者标本总计490例。通过ELISA对收集到的临床标本进行HBsAg检测后, 放-2℃保存待测。
1. 2 检测方法 按照《全国临床检验操作规程》第3版进行临床标本处理。
1. 3 指标评估 将已知浓度的10 IU/ml HBsAg定值血清, 稀释成 9、8、7、6、5、4、3 IU/ml等不同浓度, 通过20份试纸条检测出的最高稀释比例浓度确定检测灵敏度。通过灵敏度(真阳性率)和特异度(真阴性率), 将实际患病的患者和实际无病的人正确的判为患者和非患者的能力;通过假阴性率(漏诊率)和假阳性率(误诊率), 确定患者中检查为阴性或正常的人数所占的比例和非患者中检查为阳性或异常的人数所占的比例。
1. 5 统计学方法 采用Microsoft Excel软件对所得灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值等数据进行处理。
2 结果
2. 1 临床标本检测评价 490例临床标本一般特征描述分析后, 进行胶体金免疫层析法检测结果和两种ELISA试剂检测的结果一致性比较, 一致性较高。结果不一致的样本有14例, 见表1。
2. 2 中和确认试验 对14例检测结果不一致的标本继续做中和确认试验。从14个标本中和确认实验结果中发现, B试剂(S/N)值均>1.5, NEUT(%)值>50%, 故确认试验结果均为阳性。
3 讨论
HBsAg是病毒血清学标志物, 常出现在在血液中[3, 4]。结合我国乙肝病毒感染在人们生活中发病率与感染率都非常高的现状, 在对患者进行检测时, 使用灵敏度和特异度均高但又成本低的检测方法, 可以减小对患者造成的伤害。本研究对胶体金免疫层析法考核系统作进一步评价, 考核试剂的实际灵敏度为5 IU/ml , 胶体金免疫层析法检测的最大长处是快速、方便, 但由于胶体金显色需要较高浓度的标记物, 故其灵敏度会受到一定限制[5]。
综上所述, 胶体金免疫层析法在临床的推广应用具有简便、快速、特异性高, 试剂稳定, 随到随测, 仪器设备简便等优点, 通过实验发现阴性结果的基数较大, 两种检测结果的一致性会随标本的检测量增大而增大, 高浓度胶体金试纸的检测会因为特异性和单一性的出现使检测结果出现差异。ELISA检测的一致性高于胶体金免疫层析法, 胶体金免疫层析法测试纸的特异性较强, 但其HBV-M试剂灵敏度明显低于酶联免疫吸附法。在快速检测的情况下, 对敏感度的要求也较高。临床应用证明, 胶体金免疫层析法测试能够为乙型流感病毒感染引起疾病的临床早期检测、诊断和治疗提供重要依据。但胶体金免疫层析法不适用于大批量检测HBsAg, 因此在进行HBsAg筛选时, 检测医疗机构应选择敏感性较强的试剂。
参考文献
[1] 张茂海, 吴建业, 陆玲娜, 等.胶体金与酶联免疫法检测乙肝表面抗原结果分析.中国医学创新, 2011, 9(32):14.
[2] 李伶俐, 孙俊聪. 400例乙肝表面抗原胶体金试纸条与ELISA法检测结果分析.中国医学创新, 2011, 9(28):35-36.
[3] 康凤芝. 测定乙肝表面抗原(HBs-Ag)酶联免疫法与胶体金免疫层析法的临床比较分析.中国民族民间医药, 2011(16):106-107.
【关键词】早产儿 脐血 干细胞 免疫
新生儿的免疫系统发育不成熟,功能还很不完善,早产儿更是如此。早产儿由于全身各脏器的发育不够成熟,皮肤表层薄嫩,脐部也是一个开放性的伤口,血清内补体含量低,白细胞的吞噬作用差,血浆丙种球蛋白含量低下,故对各种感染的抵抗力极弱,即使轻微感染也可发展成为败血症。如何增强早产儿的免疫功能已成为目前研究的热点。脐带血是指新生婴儿脐带在被结扎后存留在脐带和胎盘中的血液,含有大量的干细胞,是成体干细胞的主要来源之一,在适宜的体内或体外环境下可分化为免疫细胞,通过细胞间的相互作用及产生细胞因子调节免疫反应 ,从而发挥免疫重建的功能[1]。由此我们进行了早产儿脐血干细胞定向培养免疫体系的研究,现报告如下:
1 对象及方法
1.1 研究对象
收集30例早产低出生体重儿患者,男19例,女11例,胎龄28-34周,出生体重950-1995g,家属均签字同意接受脐血干细胞定向培养免疫体系的研究。
1.2 方法
产妇及家属对实验知情同意,实验经医院伦理委员会批准。早产低出生体重儿娩出后,立即断脐,消毒脐带侧,行脐静脉套管插管,脐带血借宫缩力及位差重力作用流入血袋内(内含ACD-B液),摇动混匀,直至无脐血流出为止。将采集的脐带血置于4~10℃冰箱中暂存。将采集所得单人份脐血50ml左右,于4h内,用1.077g/ml Ficoll-Hypaque液分离单个核细胞。吸取界面层白细胞洗涤,用IMDM培养液(加入体积浓度为20%的类标准胎牛血清)采用血细胞计数板调整至细胞浓度为2×108L-1。将调好浓度的细胞悬液置于24孔细胞培养板中培养。每孔加入细胞混悬液1ml。将此培养体系置于37℃、体积浓度为5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养7~1d。每4d补充等量的新鲜培养基。检测扩增效率:细胞培养24,48,72h吹打混匀各孔细胞悬液,取适量悬液MTT法测定细胞增殖率。以只加培养液的培养皿为空白对照。计算细胞增殖率。细胞增殖率=实验组A值/对照组A值×100%。培养前后监测早产儿外周血CD3,CD4,CD8,CD4/CD8;IgG,IgA,IgM水平。检查均在我院肿瘤研究所及检验中心进行。
CD3,CD4,CD8,CD4/CD8采用美国进口的流式细胞仪检测,仪器型号为COULTEREPICSXL,试剂由法国免疫公司提供。IgG,IgA,IgM应用透射比浊法,采用日本7170A型全自动生化分析仪检测,试剂由上海玉兰生物技术研究所提供。
1.3 统计方法
采用SPSS13.0统计学软件进行数据统计,用t检验比较差异性。
2 结果
2.1 T细胞亚群CD3,CD4,CD8,CD4/CD8比值
脐血干细胞定向培养免疫体系后较培养前升高(P
表1 T细胞亚群检测(%)(x±s)
2.2 免疫球蛋白IgG,IgA,IgM水平比较
脐血干细胞定向培养免疫体系后较培养前IgG,IgA,IgM均升高(P
表2 免疫球蛋白水平比较(g/L) (x±s)
转贴于
3 讨论
早产儿一般未接触过子宫外环境的各种病原,也没有接触过食物蛋白等种类繁多的抗原性物质, 早产儿的血清免疫球蛋白(Ig)中绝大部分为通过胎盘的母亲IgG,而自身IgG的合成能力低下,含量很少,而且出生后随着小儿的生长发育,血循环量的逐渐增加,IgG的浓度迅速下降。早产儿白细胞的生产及储备都比较少,当患有感染及严重疾病时,白细胞消耗增加,吞噬功能和杀菌活性都可能明显降低。早产儿存在着生理性免疫低下,全身各脏器的发育不够成熟,皮肤表层薄嫩,很容易擦伤引发感染;脐部也是一个开放性的伤口,细菌容易在此处繁殖并进入血液;血清内补体含量低,白细胞的吞噬作用差,血浆丙种球蛋白含量低下,故对各种感染的抵抗力极弱,即使轻微感染也可发展成为败血症[2]。
随着免疫生物分子学的开展,发现T淋巴细胞由于其功能和表面标志不同,分为6种不同的亚群,其中最重要的是诱导-辅T细胞(CD4)及杀伤性-抑制性T细胞(CD8)。CD4T细胞亚群能释放多种淋巴因子,如巨细胞移动抑制因子、细胞活化因子、趋化因子、淋巴毒素、皮肤反应因子等,使局部出现以单个粒细胞浸润为主的炎症反应;CD8T细胞亚群通过分泌T细胞因子即TsF,抑制CD4细胞功能。正常情况下,其在免疫应答过程中互相协调和制约,以形成适度的免疫应答,使之既能清除抗原性异物,又能不损伤机体组织。当CD4细胞功能低下或CD4/CD8低于正常时,机体免疫力下降,易发生感染;若CD4细胞功能增强、CD8细胞功能低下或CD4/CD8高于正常时,则机体易发生过强的免疫应答,引起过敏表现。所以在临床上经常检测患者外周血液中T细胞亚群或CD4/CD8比值,以帮助疾病的诊断或发病机制的研究[3]。本研究中早产儿脐血干细胞定向培养免疫体系前CD4,CD8均低下,且以CD4低下明显,CD4/CD8亦低下,显示患儿细胞免疫功能是低下的。另外CD4细胞还分泌很多因子,如:IL-2,4,5,6,其中IL-4可刺激B淋巴细胞分泌抗体IgG,IgA,IgM等[2]。当CD4功能低下时,IL-4分泌也减少,则抗体IgG,IgA,IgM生成减少,所以早产儿的细胞免疫及体液免疫均低下,容易发生感染,并引起病情反复。
虽然每个婴儿脐带中只有少量的血,但这些血液中含有大量的干细胞,具有强大的增殖能力和多向分化潜能,在适宜的体内或体外环境下可分化为免疫细胞,通过细胞间的相互作用及产生细胞因子调节免疫反应 ,从而发挥免疫重建的功能。且来源方便,易于分离、培养、扩增和纯化,多次传代扩增后仍具有干细胞特性[4]。通过自体移植可以重建组织器官的结构和功能,并且可避免免疫排斥反应。本研究显示早产儿脐血干细胞可定向培养免疫体系,改善免疫功能,为干细胞移植作好准备。
参 考 文 献
[1] Qiu L, Meagher R., Herzig R.H, et al. Ex vivo expansion of CD34+ umbilical cord blood cells in a defined serum-free medium (QBSF-60) with early effect cytokines[J]. J. Hematotherapy & Stem Cell Res, 1999, 8(6): 609-618.
【关键词】 甲胎蛋白类;化学发光测定法;定量分析
【Abstract】 AIM: To establish a method of chemiluminescent immunoassay for determination of alpha fetoprotein(AFP) in human serum. METHODS: The twosite enzyme immunoassay is based on the direct sandwich technique. A monoclonal antibody was bonded to the microplate for coating and the conjugation of alkaline phosphatase to another polyclonal antibody was performed by NaIO4 method. Chemiluminescent immunoassay was established by optimizing CSPD and SapphireII luminescent system. Sensitivity, linear scope, precision, interference and recovery for the method were evaluated. The reference range was defined by testing 800 serum samples from healthy subjects.The comparison for 100 serum samples from patients was assayed by the bayer Acs:180 Automated Immunoassay system. RESULTS: The detectable minimum was 2.0 ng/mL. The linear scope was from 2.0 to 600.0 ng/mL. Average inter and intraassay were 7.7% and 6.7%, respectively. The recoveries ranged from 98.2% to 102.5%. The crossreacting rate for CEA(3 μg/mL), Ferritin(10 μg /ml), HAS(200 g/L), IgG(100 g/L) were≤0.15%, 0.04%, 2.5×10-8 and 2.0×10-8, respectively. Compared with bayer Acs:180 Automated immunoassay system, the relative coefficient was 0.994(P
【Keywords】 alphafetoproteins; chemiluminescent measurements; quanti tative analysis
0引言
甲胎蛋白(AFP)为最常用的肿瘤标志物之一. 是目前最好的可实际用于早期诊断原发性肝癌的指标,可在症状出现前6~12 mo作出诊断. 其他一些转移性肝癌及肝外肿瘤如肿瘤, 卵巢肿瘤,胃癌,胰腺癌,结肠癌,支气管癌,肾癌,乳腺癌和白血病等血液中的AFP也可增高. AFP属糖蛋白,分子量70000,含糖40 g/L,正常人血清AFP含量在2~8 μg/L之间,AFP正常值一般低于25 μg/L;本文根据化学发光免疫分析法的原理建立并研制了甲胎蛋白化学发光定量测定试剂盒,现将结果报道如下.
1材料和方法
1.1材料
抗AFP单抗腹水购自OEM公司;AFP多克隆抗体为自制;AFP纯品抗原购自Fitzgeral公司;碱性磷酸酶(ALP)由华美生物工程公司提供;化学发光底物CSPD及增强剂购自PE公司;过碘酸钠(NaIO4)、硼氢化钠(NaBH4)、乙二醇、2,4二硝基氟苯(DNFB)均购自Sigma;Sephadex G200凝胶柱层析购自LKB公司,DE52离子交换柱购自Sigma,聚苯乙烯塑料白色不透明微孔板购自深圳金灿华;luminescent化学发光仪(芬兰雷勃);洗板机(BioRad);AFP国家标准品购自中国药品生物制品检定所. 标本均为血清,清亮无溶血,-20℃冻存. 分别为健康体检门诊的成年男性200份,成年女性(非妊娠女性)200份,青少年200份,老年人标本200份,其中男女比例为1∶1;临床标本100份是陕西省人民医院放免科采集的肿瘤或疑似患者血清.
1.2方法
1.2.1AFP单克隆抗体的纯化抗AFP单抗腹水用500 g/L的饱和硫酸铵沉淀,再溶解透析后DE52换柱纯化,分部收集,测定蛋白浓度. 蛋白浓度应在4~10 g/L之间,无菌过滤,加1 g/L NaN3后分装. -20℃存放.
1.2.2AFP多抗血清制备与纯化纯品AFP免疫健康雄性山羊,首次剂量0.5 mg/只. 4 wk后加强免疫,剂量减半,共加强免疫3次. 耳静脉采血测定效价,双扩散效价>1∶128的羊,进行心脏采血,分离血清,羊抗AFP血清按照1.3.1方法进行纯化.
1.2.3碱性磷酸酶标记抗体的制备采用改良过碘酸钠乙二醇法进行标记[1],将获得的IgGALP用含100 g/L小牛血清的0.05 mol/L (pH 7.6)TBS缓冲液按1∶1000稀释成工作液,保存于-20℃.
1.2.4AFP校准品制备用系列国家标准品标定AFP纯品抗原后,用AFP校准品稀释液稀释成含量分别为0, 10, 25, 50, 15, 600 ng/mL系列浓度,用国家标准品做定量曲线进行校准品浓度测定、相关性分析,建立定量标准品.
1.2.5化学发光系统的优化[2-3]由SapphireII不同浓度的增强剂和CSPD组成底物工作液,进行化学发光值(RLU)测定,进行底物工作液的优化.
1.2.6固相化抗体微孔板的制备[4]将抗AFP单抗用0.05 mol/L碳酸盐缓冲液(pH 9.6)稀释成1.0, 2.0, 5.0, 7.0, 10.0, 15.0 μg/mL的包被浓度,按100 μL/孔的量加入包被板中,37℃包被2 h,再用含10 g/L酪蛋白的0.01 mol/L PBS (pH 7.4)37℃封闭2 h后晾干备用,确定包被选择最佳包被抗体工作浓度.
1.2.7正常人参考血清的确定用优化好的AFP化学发光定量试剂对800份健康人标本进行浓度测定,进行统计学分析,计算x+2 S,确定正常血清参考范围.
1.2.8化学发光免疫检测样品或标准品于相应孔分别加25 μL后,每孔再各加抗AFPALP75 μL,在震荡器上混匀1 min,置37℃恒温反应60 min. 洗掉游离成分,加入底物工作液50 μL,ALP催化底物脱磷酸酯,并发出463 nm的可见光,第10 min后测定各加样品孔的发光值RLU,并将数据用化学发光检测仪定量软件Luminoskan Ascent version 2.4.1软件进行定量分析.
2结果
2.1底物工作液的优化CSPD浓度为0.8, 0.4, 0.2, 0.1 mmol/L,SapphireII浓度为2.0, 1.0, 0.5, 0.25 g/L,分别用碱性磷酸酶1∶1000, 1∶10000在5, 10 min进行化学发光测定,记录不同增强剂和CSPD浓度的发光值,分别做出CSPD浓度RLU的曲线和SapphireIIRLU的曲线(图1).
分析上述数据可得出以下结论CSPD在0.4 mmol/L以下时,RLU随CSPD浓度的变化而成比例变化,在0.4 mmol/L时达到平台,可能是底物浓度在0.4 mmol/L时使酶达到饱和. 增强剂SapphireII浓度对RLU的变化较复杂,在0.5~1 g/L时达到最大RLU,以后随着增强剂浓度的增加RLU反而下降. 确定底物工作液配制的浓度为:0.4 mmol/L的CSPD,增强剂SapphireII浓度为1.0 g/L.
2.2包被抗体浓度和酶标记抗体浓度的确定根据不同包被抗体浓度测定定量标准品的发光值,分别做出不同浓度包被抗体RLU的曲线(图2). 包被浓度低时试剂的整体发光值也低,随着包被浓度的升高发光值也相应升高,在5.0 μg/mL时,发光值达到一个平台期(此时灵敏度达到一个平台期),选择标准曲线接近于直线时的包被浓度(5 μg/mL)为最佳.
2.3最低检出量平行测定20孔零值校准品血清,计算零值校准品RLU平均值(x)及标准差(S),以x+2 S为测定值代入标准曲线方程中,求出其对应的浓度值,所对应的浓度值即为最低检出量为2.0 ng/mL.
2.4特异性检测分别测定与CEA(3 μg /mL)、铁蛋白(10 μg /mL)、人血清蛋白(200 g/L)、人丙种球蛋白(200 g/L)的交叉反应率,分别为≤0.15%, ≤0.04%, ≤2.5×10-8, ≤1.03×10-8.
2.5精密度测定AFP浓度为48.8~73.2 ng/mL的质控血清,重复检测3次,每次重复20孔,进行精密度测定,计算批内、批间平均变异系数分别为6.7%, 7.7%.
2.6正常人参考血清的确定对800份健康人血清检测进行统计,其中有95.4%的小于8.0 ng/mL,正常浓度只有上限而无下限,上限浓度去除5%的不可信区间,同时参考放免检测结果和目前公认的正常值范围,本检测方法的正常人血清应小于25 ng/mL.
2.7准确度取3份临床样本分别加入5 ng/mL, 20 ng/mL, 50 ng/mL浓度的血清样品测试样品的加入回收率,对3份临床样本分别进行90%, 60%, 30%稀释计算稀释回收率,结果显示:加入平均回收率为98.6%,平均稀释回收率为102.3%.
2.8与进口试剂的比较[5]与bayer ACS: 180 全自动化学发光系统的AFP试剂共同对100份临床标本进行检测,二者所得的数值进行分析,其相关性有统计学意义(图3),LumiassayTM=1.2715×ACS: 180 -0.4126(n=100),(r=0.994, P
3讨论
甲胎蛋白(AFP)为最常用的肿瘤标志物之一,其定量检测的方法主要有放射免疫法、酶联免疫法、时间分辨荧光免疫法和化学发光免疫法,各具特点.
本研究建立的甲胎蛋白(AFP)化学发光免疫定量分析方法[6],采用自行设计AFP多抗血清制备和纯化工艺,采用改良过碘酸钠乙二醇法对AFP多抗进行ALP标记,较传统的戊二醛交联法标记效率要高,灵敏度、特异性都较好;采用金刚烷衍生物及其增强剂作为发光底物系统[7], 其酶解速度快,达到最大光信号时间短,且发光信号强、持续时间长,信噪比高,通过优化增强剂的浓度能使发光强度增强100~100 000倍;可测定浓度线性范围宽,样品无需稀释即可检测. 由于化学发光具有荧光的特异性,同时不需要激发光,从而避免了荧光分析中激发光杂散光的影响,有很高的灵敏度,该方法最低检出量为2.0 ng/mL. 该方法克服了传统的放射免疫法带来的环境污染和健康危害;操作简单,检测自动化程度高,适用于全自动和半自动仪器.
本研究建立的方法敏感性、特异性、线性范围、精密度、回收率均能满足常规临床检测要求,其采用的是开放式反应系统,因此可与大多数的化学发光检测仪器配套使用,在临床推广应用.
【参考文献】
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[2]尹东光,贺佑丰,刘一兵,等. 几种主要化学发光物质的发光性能及其化学发光免疫分析体系[J].标记免疫分析与临床,2002,9(4):225-229.
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随着我国改革开放政策的实施,人口流动量大,梅毒(syphilis)的发病率呈现逐年上升的趋势。分布范围和人群也呈扩大化趋势。本文针对梅毒螺旋体抗体(TP抗体)探讨化学发光免疫测定(CLIA)对检测梅毒的应用价值。
1.资料与方法
1.1一般资料 用盲法进行预实验,根据样本的估算公式,纳入739例梅毒患者,经临床病历证实。其中梅毒Ⅰ期279例,梅毒Ⅱ期294例,梅毒Ⅲ期72例,潜伏期梅毒42例。同时选取住院患者中的52例非梅毒患者,作为阴性对照,经临床病例和患者症状证实,为SLE,肺结核患者,也有部分为心血管疾病患者。
1.2仪器和试剂 TP血球凝集试验(TPHA)试剂盒由Omega公司提供。化学发光仪型号:北京科美生物技术有限公司提供的CHEMCLINl500;化学发光法试剂盒由北京科美生物技术有限公司提供。
1.3方法 TPHA和CLIA均按照试剂盒说明书操作,对患者梅毒螺旋体抗体进行血清血检测。TPHA的结果均有两人以上的实验员进行判读。
1.4统计学方法 采用x2检验。
2.结果
Ⅰ期279例,梅毒Ⅱ期294例,TPHA和CLIA检出率100%,两种方法结果一致。梅毒Ⅲ期72例,TPHA检出72例和CLIA检出69例;潜伏期梅毒42例,TPHA检出42例和CLIA检出37例;其中3例非梅毒患者被CLIA检测为阳性。其他非梅毒患者49例检测为阴性,见表1。
由试验得出:化学发光法检测梅毒特异性抗w的敏感度为:98.85%,特异度为:93.55%;诊断比值比为:1386.29;阳性预测值:99.56%;阴性预测值:85.96%;患病率:92.96%;阳性似然比:15.33;阴性似然比:0.01。
3.讨论
Ⅰ期、Ⅱ期梅毒两种方法均检测阳性,且结果一致。潜伏期梅毒和梅毒Ⅲ期中,CLIA检测8例为假阴性,这与患者抗体前带反应有关。在非梅毒患者中,由于CLIA灵敏度高,有患者产生生物学假阳性的出现。后查验化学发光值,均为低值,处于检测灰区。
慢性乙型肝炎(CHB)是一种呈持续进展性传染性很强的的疾病,乙肝病毒在体内长期寄生不断的损伤肝脏,进一步发展为肝硬化、肝癌等严重肝脏疾病,严重危害患者的健康,甚至危及患者生命,同时还会引发多种疾病,给患者的生活质量带来严重的影响。其治疗和预防受到临床和学者的重视,现阶段对慢性乙型肝炎的治疗以药物治疗为主,临床常采用核苷类似物进行治疗,代表药物拉米夫定、阿德福韦酯、替比夫定等[1]。本文就替比夫定与阿德福韦酯联合治疗对肝功能、免疫学的影响进行探讨,现报告如下。
1 资料与方法
1.1一般资料 选取我院自2010年01月~2011年06月收治的CHB患者,随机分为两组各50例,对照组采用阿德福韦酯治疗,观察组采用替比夫定与阿德福韦酯联合治疗;两组患者均符合2006年《慢性乙型肝炎防治指南》中的诊断标准[2],并排除抗其他类型肝炎、HIV阳性、6个月内应用抗病毒药物、妊娠及哺乳期患者;两组从年龄、性别、患病情况等各方面具有可比性(P>0.05)。
1.2治疗方法
1.2.1对照组 组口服阿德福韦酯10mg,每日1次。
1.2.2观察组 在对照组的基础上加用替比夫定片600mg口服,每日1次。
1.3观察指标 于治疗第12、24、48周时分别检测两组的HBVDNA、HBVM阴转率及肝功能、淋巴细胞亚群等。
1.4疗效评定 ①显效:临床症状消失或明显改善,HBVDNA值下降或转阴性,肝功能正常或明显好转,凝血功能好转,凝血酶原活动度(PTA)值明显上升;②以上指标均有改善;③无效:以上指标均无无改善。
1.5统计学方法 本组数据采用SPSS13.0统计学软件进行录入、整理及处理,计量资料组间比较应用t检验,计数资料应用χ2检验,以P
2 结果
2.1两组患者经治疗12、24、48周后,HBVDNA及HBeAg阴转率比较见表1。
由表1可知,观察组的HBVDNA及HBeAg阴转率明显高于对照组,二者差异明显,具有可比性(P
2.2两组患者肝功能恢复正常情况见表2。
由表2可知,观察组的肝功能复常情况明显优于对照组,二者差异明显,具有可比性(P
2.3两组患者淋巴细胞亚群比较见表3。
由表3可知,观察组与对照组的淋巴细胞亚群治疗前与治疗后均有显著改善(P
3 讨论
慢性乙型肝炎是临床常见的传染性很强的疾病,已持续性对患者肝脏的损伤为主要临床症状。常见症状分为全身性症状、消化道症状、黄疸、肝区疼痛及肝纤维等。若治疗不及时,将导致肝硬化,肝癌等疾病,严重影响患者的生活质量,甚至导致其死亡。为提高对该病的防治疗效,临床上对其发病原理进行研究,证实乙型肝炎病毒是一种专一的嗜肝病毒,常见的病毒含有Dane颗粒、小球形颗粒及管形颗粒等3种病毒颗粒。当病毒进入人体后,在逆转录酶作用下生成RNA/DNA中间体,才能进行下一步的复制。其主要分为以下3个步骤:①由病毒导致宿主体内出现共价闭合环状DNA;②以共价闭合环状DNA为模板,转录成复制的中间体;③在逆转录酶作用下,复制形成DNA。不断地复制,导致宿主发病,并使疾病呈持续进展。临床的预防和治疗药物主要以核苷类似物为主,此类药物能在体内被磷酸化生成三磷酸核类似物,从而有效抑制病毒DNA聚合酶的作用,终止DNA链的延长和合成,达到抑制病毒复制作用。进而实现对慢性乙型肝炎的控制和治疗的目的。
替比夫定具有较强的抗HBV能力,但其耐药和变异率较高,影响了其临床治疗效果,ADV在体内经被磷酸化为阿德福韦二磷酸盐,通过与三磷酸脱氧腺苷竞争结合,同时结合到HBVDNA链,终止HBV复制,耐药和变异率较低,但起效较慢,因此替比夫定与阿德福韦酯联合应用能起到互补的作用,增强抗HBV能力[3]。
在使用药物治疗的基础上,进行适当的调理对患者的康复有着重要的作用。调理主要包括:心理调节,饮食调节,作息调节及适量的体育运动等,同时密切观察转氨酶变化。也就是临床上常说的“三分治疗,七分调理”。所以在临床使用药物治疗的同时,需要医护人员重视调理的作用,以提高患者的临床疗效。
综上所述,替比夫定与阿德福韦酯联合应用,治疗慢性乙型肝炎效果显著,值得临床推广应用。
参考文献:
DOI:10.14163/ki.11-5547/r.2015.17.041
血液标本在其采集、储藏、运送等一系列过程中常会造成红细胞破裂, 使血红蛋白(Hb)被释放到血清之中, 导致血液标本发生溶血现象, 进而对血液检验结果的精准性造成极大的影响[1, 2]。由于红细胞内含有胰岛素降解酶(IDE), 当血液标本出现溶血现象后, 则可直接促使红细胞内的IDE被释放至血清之中, 降解胰岛素, 最终会对胰岛素水平的检测产生影响。本文研究不同程度的溶血标本对临床血清胰岛素检测结果的影响, 现将结果报告如下。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 选择本院2014年1~12月健康成年体检者未发生溶血的300例血液标本;所有体检者均无用药史, 且肝、肾功能各项指标正常, 无其他疾病史, 标本无高脂血、黄疸以及溶血现象。将300例血液标本采用低渗溶血法分别制备出不同程度溶血标本, 其中:轻度溶血组100例、中度溶血组100例、重度溶血组100例。三组患者一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05), 具有可比性。
1. 2 检测仪器 本文采用日本Sysmex公司生产的XE-5000全自动血细胞分析仪;采用Auto Delfia1235时间分辨荧光免疫分析仪及相关配套的胰岛素检测试剂盒进行胰岛素水平检测。
1. 3 检测方法 ①选取相关血液标本, 以3000 r/min离心10 min进行血清分离。②常温下, 严格按照时间分辨荧光免疫分析仪及相关配套试剂盒说明书对每一份溶血标本进行相关胰岛素水平检测。③采用真空注射器反复抽打血液标本, 使之发生溶血, 然后将溶血血清与非溶血血清按不同比例予以充分混合, 得到不同轻、中、重度溶血标本。④采用时间分辨荧光免疫分析仪对三组不同程度溶血标本进行胰岛素水平检测。
1. 4 溶血分级 本研究根据美国临床及实验室标准化协会相关文件, 将溶血程度分为三类:轻度溶血类, 血清Hb浓度为0~1 g/L;中度溶血类, 血清Hb浓度为1~5 g/L;重度溶血类, 血清Hb浓度>5 g/L。
1. 5 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件对数据进行处理与分析。计量资料以均数± 标准差( x-±s)表示, 采用t检验;计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。P
2 结果
300例健康成人体检者胰岛素水平检测结果提示, 三组未溶血前胰岛素水平检测结果与不同程度溶血标本的胰岛素水平检测结果比较, 差异具有统计学意义(P
3 讨论
血液标本在其采集、储藏、运送等一系列过程中常会造成血红细胞破裂, 使血红蛋白被释放到血清之中, 导致血液标本发生溶血现象, 进而对血液检验结果的精准性造成极大的影响。血液标本发生溶血后, 同样也会直接影响到血清胰岛素的检测结果, 究其主要原因:红细胞内含有胰岛素降解酶, 该酶具有较强的催化胰岛素降解作用;当血液标本出现溶血现象后, IDE从红细胞内被释放至血清之中, 并将血清之中的胰岛素分子降解, 进而直接导致临床胰岛素水平检测结果出现误差[3, 4]。
时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)属一种非放射免疫标记技术, 该技术可利用镧系金属离子作为示踪物, 通过时间分辨荧光测定法对那些不属于特异荧光进行有效排除;同时, 该金属离子还可以对一些蛋白质进行有效标记。目前, TRFIA因具有检测灵敏度高、成本低等优势, 已经与电化学发光免疫法等成为临床测定胰岛素水平的常用手段之一[5, 6]。
本文采用时间分辨免疫荧光分析法对不同程度溶血标本中的血清胰岛素水平进行了对比性研究, 结果提示:三组未溶血前胰岛素水平检测结果与不同程度溶血标本的胰岛素水平检测结果比较, 差异具有统计学意义(P
综上所述, 溶血对临床测定血清胰岛素水平具有较明显的影响, 因此, 在进行临床血清胰岛素水平检测既要全面加强检验室的环境、检测操作的规范性, 同时, 还应加强血液标本采集、储藏、运输等环节的质量管理, 进而保障血清胰岛素检测的精准度。
参考文献
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【中图分类号】R56 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484(2013)05-0180-02
Effect of the therapy of replenishing qi and nourishing yin and activating blood circulation to removing phlegm on the immunologic function in patients chronic obstructive pulmonary disease at stable phase.
1Zhou jie, 2Zhou gang, 1Sun miaomiao.
(1.The Central hospitals of Jimo Aoshanwei Shandong 266235,china. 2.The The second people's hospital of Jimo Shandong,266200,China.)
【Abstract】Objective:To investigate the effects of the therapy of replenishing qi and nourishing yin and activating blood circulation to removing phlegm on the humoral immunity, cellular immunity and cytokines in patients with chronic obstructive pulmonary disease (COPD), and to provide the basis for the treatment of COPD at stable phase. Methods:The changes of immunoglobulin a (IgA), IgG IgM, T iymphocyte subpopulation CD3, CD4, CD8, CD4/CD8+,IL-2 and TNF-а in 66 patients with chronic obstructive pulmonary disease at stable phase were detected by monoclonal antibody method and radioimmunoassay. The patients were orally given the traditional Chinese medicine with the effects of replenish qi and mourish yin and activate blood circulation to remove phlegm for six months. 60 healthy subjects served as the control group. Results:The leved of CD3, CD4, CD4/CD8 in patients with COPD were significantly lower than those in control group (p
【Key words】Chronic obstructive pubnonary disease; Chinese medicine;T Iymphocyte subpopulation; Interleukin-2; Tomor necrosis factor-а
慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)是一种具有气道受限特征的可以预防和治疗的疾病,气流受限不完全可逆,通常呈进行性发展,与肺部对香烟烟雾等有害气体或有害颗粒的异常炎症反应有关[1]。长期反复呼吸道感染导致了COPD患者肺功能下降,并因此引起的低氧血症,导致和加重肺动脉高压,促进了肺源性心脏病的发展,患者白血病吞噬作用和细胞免疫功能明显低下,尤其是细胞免疫功能低下,造成了机体对外源性感染物的易感性,从而使疾病进一步恶化或迁延[2]。本文通过对COPD患者体液和细胞免疫功能的变化,探讨中医益气养阴活血化痰法对COPD患者稳定期免疫功能的影响,现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 本组66例,均符合西医诊断标准(2007版中华医学会呼吸病分会制定的《慢性阻塞性肺疾病诊断指南》[1])。其中男42例,女24例;年龄46-79岁,平均60.2岁;病程6-40年;合并肺源性心脏病者36例。全部患者病情均处于稳定期,但均有不同程度的咳嗽、咯痰、气喘,两肺可闻及干湿性音。胸部X线检查符合慢性支气管炎、肺气肿。48例患者痰菌培养阳性,其中肺炎克雷白杆菌24例,大肠杆菌8例,卡他布兰杆菌6例,铜绿假单胞菌6例。40例外周血白细胞或中性粒细胞分类增高。所有患者均排除近期手术、自身免疫性疾病、严重器官功能障碍、活动性风湿性疾病、近3个月内服用免疫调节剂,并排除支气管哮喘患者。对照组60例均为健康体检者,其中男36例,女24例;年龄23-71岁,平均59.6岁。两组性别、年龄与治疗组无显著差异(p>0.05),有可比性。
1.2 检测方法 ①外周血淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8、CD4/CD8测定WuT3、WuT4、WuT8由武汉生物制品研究所提供,采用SP一步染色法测定。②白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-а(TNF-а)测定,采用放射免疫法,试剂盒由东亚免疫技术研究所提供。③血清免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)以琼脂单项扩散法测定,试剂盒由上海捷门生物技术有限公司提供。
1.3 统计学处理 采用X2检验、t检验。
1.4 治疗方法 治疗组患者服用益气养阴活血化痰中药颗粒剂(人参、黄芪、山药、防风、麦门冬、苇茎、丹参、桃仁、全瓜蒌、浙贝母、川芎等组成),每日2次,每次20g,疗程6个月。于服药前、服药3个月、服药6个月分别做上述指标测定。
2 结果
2.1 COPD患者服用益气养阴活血化痰中药前后T淋巴细胞、IL-2、TNF-а、免疫球蛋白的测定结果见表1-3.
与对照组比较,p
表1表明,治疗组与对照组比较,服药前T淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD4/CD8低,CD8+高(p均
3 讨论
3.1 COPD的发病机制目前尚未完全明了,目前普遍认为[3]COPD以气道、肺实质和肺血管的慢性炎症为特征,在肺的不同部位有肺泡巨噬细胞、T淋巴细胞,尤其是CD8+和中性粒细胞增加。肺巨噬细胞激活可释放ET,引起支气管平滑肌的痉挛,促进多种炎性介质的合成与释放,引起气道炎症,刺激平滑肌及肺纤维细胞的分裂增生肥大,导致气道及肺组织的损伤。IL-2作为主要的T细胞生长因子,参与人体的免疫调节,IL-2的产生增强了机体的免疫功能从而达到抑制炎症反应的作用。可见COPD患者病变过程、检测外周T淋巴细胞、IL-2、TNF-а等能反映其病情、气道和肺组织损伤轻重变化及人体的免疫状态。
3.2 抗生素治疗已广泛应用于COPD发作期的治疗,但细菌感染所致的危象,抗生素治疗效能仍是一个值得探讨的问题。肺部感染经抗生素治疗的患者,有1/4因症状持续需反复用药,且患者存在免疫功能低下,并因此而反复呼吸道感染[4]。由于感染、缺氧和高碳酸血症、组织细胞特别是淋巴细胞内无氧酵解增强,高能碳酸碱合成障碍,进而免疫功能更低下,从而感染反复发生。本文对COPD患者稳定期各项免疫指标测定结果显示,COPD患者CD3、CD4、CD4/CD8低下,CD8增高;血清IL-2水平降低,TNF-а水平增高,IgG、IgA、IgM降低,提示细胞免疫与体液免疫功能低下,与国内文献报道相符合[5]。
3.3 本研究表明益气养阴活血化痰法对COPD稳定期患者的细胞免疫和体液免疫功能都有增强和调节作用。服药前后各项免疫指标虽未达到正常水平,但与服药前比较均有显著差异(p
参与文献:
[1] 中华医学会呼吸病学分会慢性阻塞性肺疾病学组。慢性阻塞性肺疾病诊治指南[J]。中华结核和呼吸杂志,2007,30(1):8-17
[2] 钟耀东,胡毅,范优元,等。清金畅肺饮治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期48例[J]。医学研究杂志,38(6):109-111
一、国家相关专项计划政策
为贯彻落实中央有关文件精神和《国家中长期教育改革和发展规划纲要(2010-2020年)》,2012年教育部、国家发展改革委、财政部、人力资源社会保障部、国务院扶贫办联合下发文件《关于实施面向贫困地区定向招生专项计划的通知》(教学[2012]2号),文件规定“自2012年起,组织实施面向贫困地区定向招生专项计划(以下简称专项计划),即在普通高校招生计划中专门安排适量招生计划,面向集中连片特殊困难地区(以下统称贫困地区)生源,实行定向招生,引导和鼓励学生毕业后回到贫困地区就业创业和服务。”
免费医学生是“我国连续三年在高等医学院校开展免费医学生培养工作,重点为乡镇卫生院及以下医疗卫生机构培养从事全科医疗的卫生人才”。免费医学生的招生是国家专项计划的具体体现和现实实践。
二、免费医学生培养现状对招生工作的反思
自2010年国家6部委联合下文开展培养免费医学生工作以来,全国各地方医学院校已经培养了5届学生,免费医学生在校就读期间享有免除学费、住宿费并补助生活费;在校期间助学金和奖学金方面予以倾斜;毕业后直接纳入编制,确保定向生到乡镇卫生院有编有岗;上级医院在选拔用人时,优先考虑定向生。在诸多优惠政策的倾斜下,学生在校学习期间往往存在以下三方面现象:
1.免费医学生的专业学习存在“积极性不高”现象
部分学生认为入学时已经签订了就业协议,毕业后有稳定工作,自己的大学在“保险箱”中度过,成绩好坏影响不大,学习态度有一定的松懈,学习目标不明确,直接导致学习积极性不高。
2.免费医学生的就业思想存在“稳定性不强”现象
昆明医学院的学者在一项研究中发现,免费医学生选择该专业的主要原因是经济和就业原因,分别占39%和30%;免费医学生没有明确的学习日标;79%的调查对象没有明确的职业规划;且长期、终身从事基层卫生服务的观念淡薄,许多学生还没有树立长期扎根基层卫生的信念,这与培养“下得去、用得上、留得住、干得好”的基层卫生人才的目标还有一定差距。
三、免费医学生招生工作改进方向
以上两种现象反映出免费医学生的职业认知和职业发展目标不明确,导致学生专业归属感不强,学习动力不足,甚至表现为找不到学习目标。从免费医学生的招生工作角度看,应该从招生宣传、生源结构等方面进行改进。
免费医学生的招收和培养工作不仅是基层医学人才培养的重要举措,还是基层医疗卫生服务体系构建的重要环节。在招生宣传工作中,要将各地区医疗卫生行政机构和基层医疗卫生机构一起纳入免费医学生的招生工作中,使免费医学生的培养、就业及今后人生发展的各个阶段都参与到招生宣传工作中,这样才能使免费医学生的招收体现实践性、规划性和可持续性。
在免费医学生的生源方面,目前招生文件中只提到“主要是农村生源”,既然是贫困地区定向招生专项计划,毕业后的就业岗位同样回到基层,在制订招生计划时应该将这个因素作为首要影响因素进行统筹。农村地区,尤其是贫困地区的生源对基层环境更熟悉,也更了解,自然有更强的归属感,定向基层工作的职业认同感更强,有利于稳定专业思想和职业发展规划。
贫困地区定向招生专项计划和免费医学生的招收和培养工作都是落实《国家中长期教育改革和发展规划纲要》的具体政策,在中央提出深化体制改革,建立治理体系现代化的新形势下,结合新医改方针,需要地方高校在创新人才培养中不断与时俱进,为国家培养合格的社会主义建设者和可靠接班人。
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传授知识无疑是实践唐代韩愈《师说》中所倡导的“传道、授业、解惑”的理念,即教师将人类已经积淀的先进文化成果转化为受教育者个体内在力量,但这只是一种共性的要求,具体到每个教者、每个学科、每门课程,就应该有各自的个性特色,当今的语文教育必须从传统的知识性教育向发展性教育转变。
培养能力,在传授知识的同时培养学生“会学”的能力和发现问题、分析问题、解决问题的能力,以满足学生学习的愿望,让学生在学习中形成和具备认识幸福、追求幸福、获得幸福的能力。
提升素养,科学和人文,是人类文明发展中两条并行不悖的主脉。如果科学有人文相辅,就可以更明确其自身的价值和意义,明确正确的发展方向,在创新思维上有所启迪。教师在培养学生科学素养的同时,应注意提升他们关爱所有生命和自然,有高度的使命感,百折不挠,奋斗不息,思维敏捷、深刻,善于创新,言行得体且优雅,有魅力,对艺术有较高的悟性等人文素养,促进学生的科学素养和人文素养的融合与互动。
【关键词】 促甲状腺激素(tsh) 化学发光免疫分析法 试剂盒
促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone, thyrotropin, tsh)是一种由垂体前叶分泌的糖蛋白激素, 由α和β2个亚基组成, 相对分子质量(mr)为28000[1]。tsh本身受下丘脑分泌的tsh释放激素trh的调控, tsh的主要生理作用是调节甲状腺激素的合成与分泌, 血液中甲状腺激素水平与腺垂体分泌tsh的量之间有负反馈抑制关系[2]。甲状腺功能改变时, tsh的波动较甲状腺激素更迅速且明显, 是反映下丘脑垂体甲状腺轴功能的敏感指标, 因此采用灵敏度高的tsh免疫分析法具有重要的意义。化学发光免疫分析(chemiluminescent immunoassay, clia)是一种灵敏的免疫分析方法, 在免疫诊断试剂研制中已得到了广泛的应用[3]。本研究根据化学发光免疫分析法的原理研制了血清tsh的检测试剂盒, 与国内外同类产品相比具有简便、 快捷、 成本低等优点。
1 材料和方法
1.1 材料 tsh单克隆抗体(mab)、 tsh标准品抗原和辣根过氧化物酶(hrp)为sigma公司产品, 光免板为thermo electron公司产品, 化学发光底物为biorad公司产品。
1.2 方法
1.2.1 标准品的配制 将tsh抗原标定后溶于小牛血清中, 配制成含0.1, 1, 5, 20, 100 miu/l的标准溶液。
1.2.2 抗体包被板的制备 将100μl含tsh mab(0.5mg/l)的ph9.6碳酸盐缓冲液加至包被板中, 37℃包被2 h, 再用含10 mg/l bsa的0.01 mol/l ph7.4磷酸盐缓冲液于37℃封闭2 h后晾干备用。
1.2.3 酶标记物的制备 tsh的酶标记物采用过碘酸钠法制备, 然后经0.01 mol/l ph7.4磷酸盐缓冲液透析过夜后, 加入等量的甘油于-20℃保存备用。
1.2.4 检测方法 将50 μl待测样品或标准品加入包被tsh的光免板中, 37℃温育30 min, 弃反应液, 用洗涤液(含0.5 mg/l tween20的0.01 mol/l ph7.4磷酸盐缓冲液)洗5次, 加酶标记物50 μl, 37℃温育30 min后同样用洗涤液洗5次, 然后加入发光底物于5~10 min内测定各孔的发光值rlu。样本中的tsh浓度依据由标准品tsh浓度和对应的rlu建立的数学模型进行定量。
2 结果
2.1 动力学性质 在hrp鲁米诺h2o2发光体系中, 将不同量的免疫复合物加入发光液中, 发光强度(rlu)随反应时间而变化。10 min后rlu接近峰值, 在5~15 min内rlu较为稳定, 随后开始缓慢下降。
2.2 反应条件优化
2.2.1 加样量对rlu的影响 样本和酶标记物的加样量分别为50 μl和100 μl考查标准品(0、 0.1、 1、 5、 20、 100 miu/l)rlu, 发现加样量为100 μl与50 μl rlu相差不大, 说明50 μl的加样量反应能达到平衡(图1)。
图1 加样量对rlu的影响(略)
2.2.2 反应模式对rlu的影响 采用二步法。第一步: 加入标准品和待测样品后, 将反应体系在37℃分别温育15、 30、 45、 60 min; 第二步: 加入酶标记抗体后, 将反应体系在37℃分别温育15、 30、 45、 60 min。结果表明温育时间为30 min时反应皆能达到平衡(图2)。
图2 温育时间对rlu的影响(略)
a: 第一步温育时间对rlu的影响; b: 第二步温育时间对rlu的影响.
2.3 稳定性 将试剂盒放置于37℃ 6 d后, 比较与放置前参考标准品各点rlu值, 参考标准品各点rlu值未见明显降低, 且本底发光值无明显升高, 表明试剂盒标准曲线无明显漂移, 满足稳定性要求。
2.4 方法学评价
2.4.1 标准曲线与灵敏度 在设定的免疫反应和发光条件下, 以标准血清的浓度(0~100 miu/l)制作的标准曲线见图3。同时测定20个零标准, 用零标准均值加上2倍标准差, 计算出此方法的灵敏度为0.0788 miu/l。
图3 tsh标准曲线(略)
2.4.2 精密度 取低(4.44 miu/l)、 中(19.45 miu/l)和高(79.23 miu/l)3种tsh浓度各重复测定10次, 测定批内cv分别为6.2%、 3.3%和4.6%, 平均为4.7%。隔日分别进行5次独立试验, 测批间cv分别为8.3%、 7.6%和9.3%, 平均为8.4%。
2.4.3 准确性 在已知tsh浓度的血清中加入3种不同浓度的标准血清,测定加入回收率为93.05%。将tsh浓度为44.42 miu/l的血清用标准零血清分别按1/2、 1/4、 1/8、 1/16稀释, 测量各稀释浓度的tsh含量, 测定稀释回收率为99.86%。
2.4.4 特异性 在已知浓度的血清样品中加入不同浓度的lh、 fsh和hcg后, 对tsh的测定无干扰。
2.4.5 与进口试剂的比较 将研制的tsh clia定量检测试剂盒与abbott architect i2000全自动化学发光系统共同对30例正常人、 20例甲亢及80例甲低临床标本进行检测, 通过数据分析, 得出两个检测系统所得数值具有明显相关性(图4)。
图4 与abbott全自动化学发光系统相关性曲线(略)
3 讨论
血清促甲状腺素定量检测的方法主要有放射免疫法、 酶联免疫法、 时间分辨荧光免疫法和化学发光免疫法等几种[4]。考虑到目前化学发光和时间分辨荧光分析仪器几乎全部为国外厂商生产, 而绝大多数厂商采用仪器加试剂盒捆绑销售的垄断模式, 并在仪器中人为设置排它性检测程序, 从而抬高了配套试剂盒价格, 增加了检测成本, 所以本工作旨在开发国产低价、 稳定、 通用的人血tsh clia试剂盒。首先对读数时间进行了动力学研究, 发现其在5~15 min内rlu处于平台期,反应时间选择10 min。其次对反应条件进行了实验摸索, 在不同的温育时间和加样量的条件下, 各rlu值相差不大, 因此选择了50 μl的加样量与两步共1 h的反应时间。
我们研制的tsh化学发光免疫测定试剂盒通过方法学鉴定表明无论是灵敏度、 准确性、 特异性等技术指标均达到了临床诊断的要求[5]; 同时该方法具有操作方便, 反应时间短和成本低等优点, 具有较广阔的市场应用前景。
【参考文献】
[1] hay id, bayer mf, kaplan mm, et al. american thyroid association assessment of current free thyroid hormone and thyrotropin measurements and guidelines for future clinical assays[j]. clin chem, 1991, 37(11): 2002-2008.
[2] 尹东光, 贺佑丰, 刘一兵, 等. 促甲状腺激素化学发光免疫分析的研究[j]. 分析化学研究报告, 2004, 7(32): 893-896.