统计学相关知识范文

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篇1

【关键词】 枳实;心血管系统;呼吸系统;大鼠

Abstract：Objective To investigate the different effects of 2 species of Fructus aurantii immaturus on cardiovascular and respiratory system. Methods The extract of 2 species of Fructus aurantii immaturus were administered to anesthetized rats by duodenum and the dosages were 4.2， 2.1 g crude drug/kg respectively. After administration， a continuous observation of blood pressure， respiration and ECG effects for 4 hours were performed. Results Compared with the control group， both of Citrus aurantium and Citrus sinesis exerted a transient increase to respiration rate after 20 min administration. No significant impact was observed during the experiment period on the ECG. The influence of Citrus aurantium on blood pressure was more significant. Compared with the control group， the effects of SBP， DBP and MBP reduced was observed in high-dose group of Citrus aurantium after 40， 60， 80 min administration， and so in low-dose group of Citrus aurantium after 60 min. The impact duration was up to 2 hours or more. However， the antihypertensive effect of Citrus sinesis was not obvious. And the blood pressure lowering effect of Citrus aurantium was superior to Citrus sinesis. Conclusion The 2 species of Fructus aurantii immaturus exert a transient excitatory effect on respiratory system. And the direct effect of them on heart is not obvious. The blood pressure lowering effect of Citrus aurantium is superior to Citrus sinesis. The attention should be given in the clinical usage of Fructus aurantii immaturus.

Key words：Fructus aurantii immaturus;cardiovascular system;respiratory system;rat

2005年版《中华人民共和国药典》(一部)规定枳实来源于芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种或甜橙Citrus sinesis Osbeck的干燥肉果，功效破气消积、化痰消痞，其主要有效成分是黄酮类和生物碱类，临床主要用于心血管和胃肠系统相关疾病的治疗[1-2]。然而，现代研究结果表明，不同品种枳实黄酮和生物碱类有效成分存在较大差异[3-5]，其是否影响枳实的功效，影响的程度如何，将直接制约其临床的应用。笔者对比研究来源于酸橙和甜橙两个品种的枳实对大鼠心血管和呼吸系统的影响，以期为临床合理用药提供依据。

1 实验材料

1.1 药物

甜橙和酸橙枳实分别采自贵州和重庆，经北京中医药大学生药学教研室刘春生老师鉴定，分别为甜橙Citrus sinensis Osbeck和酸橙Citrus aurantium L.的干燥幼果。分别称取甜橙枳实和酸橙枳实一定量，水蒸气蒸馏法提取挥发油6 h，滤过，滤液和挥发油留用。药渣加入70%乙醇回流提取2次，滤过，滤液和提取挥发油的滤液合并，减压回收乙醇，浓缩成每1 mL相当于1 g原药材的提取液。挥发油用等体积的乙醇稀释，分别加入各自的提取液中，即得实验样品。

1.2 动物

SD大鼠(Ⅱ级)50只，体重(250±20)g，雄性，中国药品生物制品检定所提供，许可证号：SCXK(京)2005-0004。

1.3 仪器

RM6240B多导生理记录仪，成都仪器厂生产。

2 实验方法

SD大鼠随机分为5组：对照组(蒸馏水)，酸橙大(4.2 g原药材/kg)、小剂量组(2.1 g原药材/kg)及甜橙大(4.2 g原药材/kg)、小剂量组(2.1 g原药材/kg);每组10只。实验前禁食12 h，实验时用10%乌拉坦1 mg/100 g腹腔注射麻醉动物，手术分离右侧颈总动脉，插管连至YPJ01型压力换能器记录血压;做气管插管术连HX300型呼吸流量换能器记录呼吸;用肢体Ⅱ导联进行心电描记。以上换能器均连于RM6240B型多导生理记录仪进行连续记录和实时分析，同时分离十二指肠以备给药。术后稳定30 min，待动物的呼吸、心电、血压平稳后，经十二指肠给药。酸橙大、小剂量组及甜橙大、小剂量组均给予0.84 mL/100 g等体积不同浓度的受试物药液，对照组给予等体积蒸馏水。稳定10 min给药，药后连续采样记录4 h。比较各实验组每20 min的收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、平均动脉压(MBP)、呼吸频率、呼吸幅度、心电图(包括P波幅度、R波幅度、PR间期、QRS波群时程、QT间期、ST段、T波幅度)及心率(HR)的变化率[6]。

3 统计学方法

计算各实验组药后每20 min变化率(药后每20 min均值减药前10 min均值，除以药前10 min均值，乘以100)，结果以—(—以)±s表示，采用SPSS 13.0统计软件进行方差分析(LSD，Tamhane’s T2)，比较对照组及甜橙与酸橙各剂量组的作用差异。

4 结果

4.1 酸橙和甜橙枳实对大鼠血压、心率变化的影响(见表1)

4.2 酸橙和甜橙枳实对大鼠呼吸变化的影响(见表2)

4.3 酸橙和甜橙枳实对大鼠心电图的影响

各实验组大鼠心电图(包括P波幅度、R波幅度、PR间期、QRS波群时程、QT间期、ST段、T波幅度)均未见明显变化(数据略)。表1 酸橙和甜橙枳实对大鼠血压、心率变化的影响(—(—响)±s，%)注：与对照组比较，*P

5 讨论

枳实主要含有黄酮类、生物碱类和挥发油类成分[2]，其所含黄酮类成分差异明显[3-5]，酸橙枳实的主要黄酮类成分为橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷及柚皮芸香苷，而甜橙枳实主要为橙皮苷及柚皮芸香苷，不含有柚皮苷及新橙皮苷。经对不同品种30多个批次枳实研究结果显示，这种差异是由于品种不同造成的，而且其主要生物碱辛弗林含量相差1倍[4]。研究表明，枳实所含生物碱和黄酮类成分对心血管系统的作用不尽相同，甚至相反。辛弗林是一种拟交感神经成分，作用于肾上腺α和5-羟色胺(5-HT)受体，具有降低门脉压和升高动脉压的作用[7-9]，其作为升高血压和抗休克的药物在临床应用。枳实黄酮类成分对心血管系统具有多方面的作用，包括抗血小板聚集、抗氧化、降脂以及降压等，其通过保护血管内皮细胞功能而具有降压作用是通过一氧化氮(NO)环化酶途径实现的[10]，同时其直接扩张血管作用是通过NO之外的途径实现的[11-13]。

本实验考察了来源于酸橙和甜橙枳实全成分对正常大鼠心电图、血压、呼吸系统的影响。结果显示，2种枳实给药后20 min动物呼吸幅度有较明显的升高，但作用持续时间短，随后即恢复正常，提示枳实对呼吸道平滑肌有一定的兴奋作用，但作用短暂。实验未观察到2种枳实对大鼠心电图的明显影响，但酸橙对血压的影响较显著，与对照组比较，酸橙大剂量组大鼠SBP、DBP及MBP的降低于药后40、60、80 min;小剂量组于药后60 min有显著差异，提示酸橙确有较好的降压作用，作用持续时间可达2 h以上。甜橙枳实对血压的降低并不明显，而且酸橙的降压效果明显优于甜橙，差异有统计学意义。造成此种差异的原因应该是甜橙和酸橙所含有效成分有质和量的差异所致，即枳实升压成分辛弗林在甜橙中的含量明显高于酸橙，而具有降压作用的黄酮类成分含量酸橙明显高于甜橙[4]，2种组分的综合作用结果是酸橙枳实对血压的影响明显大于甜橙枳实。

本研究结果提示，中药的功效与内在各种成分含量、组成比例和成分类型密切相关，中药品种来源可能直接影响药效作用，从而造成临床疗效差异。

参考文献

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篇2

一、切实提高对学校安全极端重要性的认识

“生命不保，谈何教育”。安全管理工作是学校工作的重要组成部分，加强安全管理，堵塞学校安全隐患漏洞，确保师生生命财产安全，是教育部门和学校的神圣职责。各地各学校必须以对生命高度敬畏的态度，深刻认识加强学校安全管理工作的极端重要性，切实增强做好学校安全管理工作的责任感和使命感，把学校安全管理工作摆在更加突出的位置。各地各校要以以上几起事故为戒，进一步提高学校管理者以及广大师生员工对安全工作极端重要性的认识，克服麻痹思想和侥幸心理，牢固树立“人命关天、安全第一”的思想，认真做好学校安全管理各项工作。要进一步明确学校安全工作的领导责任，建立健全和严格落实学校安全责任制和责任追究制，凡因安全管理不善造成重大刑事案件、安全事故和群众性事件的学校，一律要严格按有关法律法规和市教育局的有关规定，严肃追究有关领导和责任人的责任。

二、切实配齐配足管好学校安保力量

鉴于目前学校及周边安全面临的严峻形势，各地必须切实贯彻落实公安部关于学校管理的“八条措施”和教育部“六条措施”精神以及省公安厅、省教育厅《关于进一步做好学校和幼儿园及周边安全工作的通知》、嘉兴市公安局嘉兴市教育局《关于贯彻落实公安部八条措施和教育部六条措施进一步加强学校和幼儿园及周边安全工作的意见》（嘉公通字〔〕27号）等文件要求，积极争取当地政府支持，按规定为学校配齐配足门卫、保安人员，加强校园封闭管理，严禁无关人员进入校园。已配备保安的学校要加强保安队伍管理，进一步严肃整顿保安队伍，对一些责任心不强、自身素质低下、作风不正的人员坚决进行清理，提高保安队伍的素质。明确保安人员职责，规定保安人员到校时间、加强保安人员巡逻，延伸保安人员巡查范围，特别是在上学、放学重点时段，更应增派人员加强校门口的安全防范和秩序维护，集中力量关注校门口及周边学生的安全状况。有条件的学校更应积极争取公安部门支持，在学校设立警务室（站），通过民警定期驻校加强学校的安全工作。

三、切实加强学校大门出入管理

各级学校要加强封闭管理，严禁任何无关人员、车辆进入校园。确因工作关系需进校的，必须严格查验身份、加强盘查；必须与联系人沟通并进行确认，履行严格登记备案手续后方能进入校园；必须印制联系单，被访问人签字后经门卫备案才能出校园；必须做到人人必查、人人细查。

严格控制家长进入校园接送、探望学生，特殊情况的必须凭联系单或接送卡经上述步骤确认后才能进入校园；上学、放学重点时段，确因校门外场地限制、部分家长需进校接学生的，应划出限制区域，并由专人维持秩序，坚决杜绝家长随意进班级接学生的情况；学生在教学时间内出校门（含住宿生在规定时间内外出），必须先与家长联系，经确认后凭班主任签字或分管领导签字的凭证，门卫方可放行。

各级学校要根据省教育厅有关文件要求，切实减轻学生过重课业负担，制定科学的作息时间并严格学校作息时间管理。学校要明确上学、放学的具体时间以及学校开、关校门的具体时间，通过各种方式告知家长并在校门口向社会公示，告知家长要按规定时间接送子女。对于确因特殊情况需要在学校开门前提前到校的学生，学校要允许其提早进入校园，并指定专门地点对学生进行集中管理，安排专门人员值班监管；放学后确因特殊情况不能及时离校的学生，学校应安排其在校活动，指定专人管理，直到其安全离校。面向社会开放体育场馆的学校，必须对进校锻炼人员进行办证管理，确保学校安全稳定。

四、切实加强学校及周边治安综合治理

各县（市、区）教育部门要充分利用校园及周边治安综合治理领导小组办公室设在教育局的优势，尽快协调综治、公安、城管等部门，组织专门人员，结合正在开展的春季安全生产大检查暨“迎世博、保安全”专项安全大检查行动，对辖区内学校及周边治安环境进行集中排查，认真梳理，明确整治重点。主动协调相关部门，联合执法，下大力气整治学校及周边环境和安全秩序，重点要加强校园周边网吧、游戏机室、台球室、发廊和浴室等营业场所的整治，形成长效管理机制，为学生的健康成长创造良好的环境。

五、切实加强师生的安全教育，提高防范意识

各地各校要认真吸取福建南平等几起恶性案件的教训，进一步加强对师生的安全教育，提高师生应对各种突发事件的能力。“5.12”——全国第二个“防灾减灾日”即将来临，各地各级学校要根据教育部门制定的安全知识宣传教育活动方案，不折不扣地开展好安全知识宣传教育，加强应急避险疏散演练，提高学生的安全防范意识和在危险中自救逃生的能力。天气渐渐炎热，目前我市已发生3例学生溺水死亡事故，各地各级学校要认真贯彻落实嘉兴市教育局《关于在全市中小学开展预防溺水事故专项教育活动的通知》（嘉教基〔2010〕62号）文件精神，开展好学生防溺水专项教育活动，尽量减少学生溺水死亡事故。强化学校班主任和心理咨询工作，认真细致排查学生间的各种矛盾纠纷，有效进行心理疏导，及时化解学生间存在的不安定因素，共同承担起维护学校安全的责任。

篇3

社会支持、应对方式作为生活事件与应激反应的中介变量，共同影响个体的心理应激和反应过程，也影响身心健康的症状表现。社会支持是指以个体(被支持者)为核心，由个体和他人(支持者)通过支持所构成的人际交往系统，应对是个体面对压力时为减轻其负面影响而作出的认知和行为的努力过程。近年来，不少研究者对某个特定人群的社会支持、应对方式及其相关性进行了研究，结果证明个体社会支持状况与应对策略存在显著的相关。

大学阶段是生理心理发育及适应社会的关键时期，也是心理冲突和压力的高发时期，因此大学生常被作为研究社会支持和应对方式的对象，只是以往的研究多从性别、生源地、专业等角度进行比较，对年级差异的探讨相对较少。研究证明不同年级大学生的压力特点存在显著差异，心理健康状况也存在显著差异，这意味着研究大学生社会支持和应对方式特点的年级差异将具有重要意义。

1　对象与方法

1.1　对象　采取方便取样的方法，选取重庆市3所高校(重庆大学、西南大学、重庆师范学院)大一至大四年级的本科生，发放问卷400份，获得有效问卷379份，有效率为94.75％。其中，男生122人，女生157人；大一111人。大二93人，大三95人，大四80人。

1.2　方法

1.2.1 社会支持评定量表(SSRS) 该量表共有10个条目，包括客观支持(2、6、7题)，主观支持(1、3、4、5题)和支持的利用度(8、9、10)3个维度。本研究考虑到大学生的实际情况，对量表中的一些项目进行了修订；第4题中的“同事”改为“同学”第5题删去“儿女”一项；第6、7题中的“配偶”分别改成“恋人”，并且均加入“教师支持”一项。已有研究表明修订后的量表有较高的信度和效度。

1.2.2　应对方式问卷　该量表共62个题目，包括解决问题、自责、求助、幻想、退避、合理化6种应对方式。

1.3　统计学处理　全部数据输入SPSS 11.0统计并进行统计分析，方法采用单因素方差分析、t检验和单因素相关分析。

2　结果

2.1　不同年级大学生社会支持差异分析　见表1。

表1显示，不同年级学生获得的客观支持、支持利用度以及总分支持存在显著差异(P＜0.01)，但主观支持差异不显著。

2.2　不同年级大学生应对方式差异分析　见表2。

表2显示，不同年级学生的应对方式在自责、幻想、退避、合理化4个方面均存在显著差异(P＜0.05或P＜0.01)，在问题解决、求助两个方面的差异不显著。

2.3　不同年级大学生社会支持和应对方式两两分析比较见表3。

表3显示，在客观支持方面，大二的均值显著低于其它年级(P＜0.01)，大三也显著低于大四(P＜0.05)，这说明大四、大一获得的客观支持显著高于大二大三；在支持利用度方面，各年级两两比较的结果均存在显著性差异(P＜0.01或P＜0.05)，这说明大一学生支持利用度最高，其后依次是大二、大三、大四；在总分支持方面，大一的均值显著高于大二、大三(p＜0.01)，大四的均值显著高于大二(P＜0.05)，说明大一、大四获得的总支持显著高于大二、大三；大二学生自责应对均值相对于其它年级都高，具有显著意义(P＜0.01或P＜0.05)，大三学生的自责应对均值显著高于大四(P＜0.05)；大一学生幻想应对方式的均值显著高于高年级学生(三、四年级)(P＜0.01或P＜0.05)；大二学生退避应对方式的均值显著高于大一、大四学生(P＜0.01或P＜0.05)，大二学生合理化应对方式的均值显著高于大一、大四学生(P＜0.01)。

2.4　不同年级大学生社会支持与应对方式的相关研究 见表4。

表4显示，在各年级水平上，客观支持、主观支持、支持利用度、总分支持与解决问题的应对方式均呈正相关。其中，主观支持、支持利用度、总分支持与解决问题的相关系数均具有显著意义(P＜0.05或P＜0.01)，而客观支持与解决问题的相关系数均不具有显著意义。社会支持各因子与求助应对的相关系数在4个年级水平上均具有显著意义(P＜0.05或P＜0.01)，支持利用度与求助的相关程度均高于其它支持因子与求助的相关程度，且大一、大四年级的相关程度高于大二、大三。在各年级水平上，自责、幻想的应对方式与社会支持多呈无显著意义的负相关，仅大一学生的幻想应对与社会支持呈无显著意义的正相关，在大一和大四年级水平上，退避和客观支持的相关系数具有显著意义(P＜0.05)。与其它社会支持因子元显著相关；合理化的应对与社会支持各因子在4个年级水平上均无显著相关。

3　讨论

本研究表明，不同年级学生获得的客观支持、支持利用度以及总分支持存在显著差异(P＜0.01)，但主观支持差异不显著，这说明年级也是影响社会支持的因素。大一和大四学生获得的客观支持以及总支持高于大二和大三，这与各年级的任务相关：大一学生面临许多的适应问题，大四学生面临毕业、就业、考研等重大事宜，因此相比而言这两个年级更能获、得外界的关注和支持；支持利用度随年级升高而具有下降趋势，这可能与自我意识、自立需要的发展相关，高年级学生更愿意用自己的方式去解决问题。

本研究还表明，不同年级学生的应对方式在自责、幻想、退避、合理化4个方面均存在显著差异(P＜0.05或P＜0.01)・其中，大一学生中采用幻想应对方式的人多于高年级学生，大二、大三学生中采用自责、退避、合理化应对方式的人多于一、四年级学生。这可能与各年级所处时期以及各时期面临的处境有关：大一年级学生社会化程度不高，依赖性强，心理承受力以及应对压力的能力均不够成熟，因此采用幻想应对的可能性更高，这与有关研究结果类似；大学二三年级是学业压力增大、外界给予的关注减少的时期，加之正处于应对能力由不成熟到成熟的过渡期，因此在面对压力时心理更脆弱，更易采取些消极的应对方式(自责、退避、合理化)，许多研究都表明大学二、三年级是心理危机最为严重的时期。

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2012年，我校正式启动了国家级 “大创”的申报工作，并逐步构建了国家级―省级―校级三层次的“大创”训练体系，不断完善并形成了具有我校特色的“大创”运行机制和管理模式，并且用创新手段为“大创”赋予新的内涵。化学与化学工程学院2012年大创项目立项23项，其中国家级项目4项，校级项目19项；2013年立项11项，其中国家级项目2项，省级项目1项，校级项目8项；2014年立项2项，均为省级项目。

2 实施存在的问题及成因分析

大学生创新创业项目相对于其他项目比较特殊，项目的负责人是学生，涉及人员众多，与一般的科研项目又有区别，根据西安文理学院化工院的近期实践，笔者认为大学生创新创业训练计划项目的实施过程应注意的问题表现在以下几点。

2.1 学生重申报，轻过程，虎头蛇尾

经过辅导员和任课教师的动员，高年级学生申报项目时候非常踊跃，获批之后有大三课业多，大四面临就业和考研的压力，没有时间和精力进行项目研究，无法保证质量，因此建议鼓励大一、大二学生申报，获批之后，刚好大二、大三年级，有充裕时间精力进行研究。现在的大学生为了日后能够顺利就业，不仅课业需要取得优异的成绩，还要参加各种资格证书考试，如英语四六级、计算机二级等。为了准备这些考试，学生需要投入大量的时间和精力，因此学生可以利用的课余时间并不充裕。完成学业是学生的基本要求，在选择参加项目的学生时，应充分考虑学生的自身情况。如何根据专业背景不同，制定相应条件要求，并能使学生合理安排时间，处理好学业和项目的关系，是国家级大学生创新创业训练计划能可持续发展应关注的问题。

2.2 考核评价机制建立应细化

每个项目任务书中都有预期成果形式，如、编写研究报告、结题报告等，国家级大学生创新创业训练计划项目的根本宗旨是培养学生的创新能力、实践能力。如何考核学生项目实施过程中的创新能力、实践能力，尚需建立和细化评价机制，以便更好地提高项目完成质量。在考评制度方面，评价的方式要因成果而异，实行分类考核。要力求使考核变得更为客观、合理和科学，从而营造和谐的科研与创业型人才成长环境。

对于学生的考核评价：学校为吸引学生参与项目，应采取了不同措施。以西安文理学院为例，学校为提高学生的积极性，根据学生完成项目的验收情况，对于研究成果已经达到毕业论文（设计）要求的，经审核鉴定后可代替项目负责人本科毕业论文（设计），对于学生以第一作者公开发表的论文予以奖励，其中核心论文奖励1000元，普通论文奖励300元。对通过结题验收的项目所有成员发放结题证书，若在研项目学生因出国或申请保研等需要我们会出具中英文证明材料；对通过结题验收的项目进行评定，评选出10%的优秀项目，并且颁发证书；

对于指导教师的考核评价：对于通过结题验收的项目，给予指导老师相应工作量的认定，其中国家级项目50课时，省级项目30课时，校级项目15课时。学生以第一作者发表的论文，指导老师是通讯作者或第二作者的，计入老师的年度科研工作量。这些措施对发挥教师、学生的积极性起到了一定的作用。

对二级学院的考核评价：我校各级“大创”项目的日常管理工作都委托院系来开展，如项目的立项评审、中期检查和结题答辩等，为了提高院系的管理能动性和管理绩效，学校应建立明确的激励机制，对“大创”开展良好、管理有方、成效显著的院系授予“大创”先进管理单位，对在这方面有突出贡献的管理人员授予“大创”先进工作者称号，颁发获奖证书，并且给予物质奖励，这使得各院系“大创”管理工作的积极性和热情都很高。将国家大学生创新创业训练计划项目纳入西安文理学院 “513”工程绩效考核，计入对二级院系的绩效考核等。

2.3 经费预算与使用报销

目前有很多项目负责人没有认识到经费预算的严肃性，没有认识到严格经费管理、合理使用经费的重要性。他们往往把项目预算编制看作是得到科研经费的必要手段，许多预算都是在拍脑袋的过程中形成的，不能全面真实地反映获得预期成果所必需的项目直接成本和间接成本，这就造成经费申请到了，但一些必要的正常开支却因事先未编入预算而无法在该项目报销核算的状况。预算编制与实际经费使用情况严重脱节非常不利于课题的开展。

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【关键词】 肥胖；KATP通道；肠系膜动脉；高血压；血管平滑肌细胞

ABSTRACT: Objective To investigate the effect of highfat dietinduced obesity on KATP channels in vascular smooth muscle cell (VSMC) and blood pressure. Methods Obesity was induced in rats by highfat diet for 20 weeks. Then these rats were pided into two groups. One group was fed with a highfat diet and the other group was fed with standard chow for 10 more weeks. Control rats were fed with standard laboratory rat chow. Function and expression of KATP channel in mesenteric arteries were characterized using myograghic system and patch clamp， respectively. Results The results indicated that highfat diet decreased function and expression of KATP channel in rat mesenteric arteries and increased blood pressure in rats. After conversion to a standard chow for 10 weeks， most of these effects were restored. Conclusion Highfat diet impaired KATP channel in VSMC， which may underscore reversible hypertension induced by highfat diet， at least in part.

KEY WORDS: obesity; KATP channel; mesenteric artery; hypertension; vascular smooth muscle cell

肥胖是高血压发生的一个重要危险因素，两者呈线性相关[1]。但是，肥胖导致高血压的具体机制还不清楚。血管平滑肌组织的KATP通道可影响细胞的静息膜电位，在调节血管阻力及血压中起着重要作用。大量的资料已证实，KATP通道的功能与高血压的发生密切相关。KATP通道不仅存在于血管平滑肌组织，在胰岛β细胞、脑神经元细胞等也有广泛表达。近年来的研究发现，肥胖导致的糖脂代谢紊乱和大量脂肪因子(包括炎症因子)的分泌可抑制胰岛β细胞和脑神经元KATP通道的功能[23]。所以，肥胖也有可能通过影响血管平滑肌细胞KATP通道而影响血压。但是，尚缺乏关于肥胖对血管平滑肌细胞KATP通道影响的直接研究。本研究就是通过检测肥胖大鼠动脉平滑肌细胞的KATP通道功能来验证上述假设。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选择健康雄性SD大鼠30只，体重(140±5)g。随机抽取20只，以高脂饲料喂养，获得肥胖大鼠模型(DIO组)。另外10只，以普通饲料喂养，做为对照组。喂养20周后，高脂饲料喂养的20只大鼠再随机分为两组，一组继续以高脂饲料喂养(DIOHF)，而另一组则改为普通饲料喂养(DIOSD)。再喂养10周。所以在实验的第30周末，共有三组大鼠：DIOHF组(n＝10)、DIOSD组(n＝10)、对照组(n＝10)。高脂饲料组成为：48.65%脂肪，1.2%胆固醇，20%蛋白，30.15%碳水化合物[1]。大鼠购自西安交通大学医学院动物实验中心。喂养满30周后，大鼠麻醉后处死。肠系膜动脉和内脏白色脂肪组织迅速分离。以0.1mmol/L Triton X100冲洗部分肠系膜动脉以去除血管内皮。这些组织直接使用或迅速冷冻保存。

1.2 血压、体重与血清学的检测 以无创测压系统(ABI公司，美国)测定大鼠鼠尾血压[1]。血压以平均动脉压(mean arterial pressure， MAP)表示，每次血压测定3遍，取其平均值。在20周末、30周末，分别检测血甘油三酯(triglyceride， TG)、胆固醇(total cholesterol， TC)、游离脂肪酸(free fatty acid， FFA)、血糖浓度[2]。血样取自鼠尾静脉(取血前大鼠禁食12h)。离心后将血清保存于-80℃冰箱。

1.3 血管舒张反应的测定 采用新鲜的处理好的血管(包括去内皮的和保留内皮的两种)，将其剪成约1mm长的动脉环，套在两个L型的金属针上，置入Krebs液(mmol/L)：60 NaCl、15 NaHCO3、63.5 KCl、1.2 MgCl2、1.2 NaH2PO4、1.5 CaCl2和5.5葡萄糖，37℃恒温水浴，其中一个连接FT03C张力换能器(Grass Instrument Co. Quincy，美国)，另一个连接微调装置(调节负荷张力)。持续通入含95%(体积分数)O2和5%(体积分数)CO2的混合气体，使pH保持7.4左右，平衡1h后开始实验。以60mmol/L KCl预收缩动脉环，收缩持续稳定后累加浓度法加入KATP通道开放剂：吡那地尔(Pin：10-10～10-3mol/L)，获得剂量舒张反应曲线。Pin诱发的舒张用相对于预收缩剂产生收缩效应的百分比表示(吡那地尔和格列苯脲均购自Sigma公司)。

1.4 细胞分离及电生理学实验 本实验采用一步法分离动脉平滑肌细胞。将分离干净的新鲜动脉置入低钙分离液中剪成1～3mm的碎块，于室温下静置平衡20min。然后将血管碎块转移至2mL的酶分离液，37℃恒温水浴箱内振荡消化15～20min，低钙液冲洗3～4遍，巴斯德吸管轻轻吹打，获得单个细胞，加5g/L牛血清白蛋白4℃保存，4～5h内使用。

使用膜片钳全细胞记录方式记录细胞电流。将细胞放于倒置相差显微镜载物台上，选择折光性好，胞核清晰的细胞进行实验。所有记录电流经Axopatch 200B膜片钳放大器放大，Digidata1320A(Axon Instruments；美国)输入计算机，pClamp 7.0软件分析处理数据。电极用玻璃毛细管经微电极拉制仪(PP2830，日本)分两步拉制，抛光充灌电极内液后电极阻抗为5～8MΩ，待电极与细胞达到千兆欧姆时封接、破膜。膜电容和串联电阻均经放大器补偿，以-80mV钳制膜电位，给予从-60mV～+60mV的方波刺激，步幅为10mV，采样软件为pClamp8.0，采样频率为5kHz。高钾细胞外液灌流30～60s诱发VSMC的KATP通道电流，KATP电流可被10μmol/L Pin激活，而被10μmol/L Glib抑制，格列本脲敏感电流为KATP通道电流。电流值以电流幅值与膜电容相比即电流密度(pA/pF)表示。5mmol/L钾细胞外液(mmol/L)：135 NaCl，5.4 KCl、1.2 MgCl2、0.1 CaCl2、10 HEPES、和10葡萄糖，pH 7.4/NaOH。高钾细胞外液为将上述溶液中NaCl由KCl取代而配制。电极内液(mmol/L)：140 KCl、10 HEPES、10 EGTA、1.2 MgCl2、1 CaCl2、0.1 Na2ATP、1 MgADP、0.1 Na2 GTP (pH 7.4/KOH)。

1.5 统计学处理 用SPSS13.0软件进行统计分析。计量资料采用±s表示，三组间的比较采用方差分析，两组间的比较用独立样本t检验。

2 结

果

2.1 高脂饮食大鼠的一般特征的比较 在20周末，高脂饮食大鼠(dietinduced obesity， DIO)的体重和血压明显高于对照鼠。血清游离脂肪酸、甘油三酯和胆固醇浓度在DIO鼠也明显升高。在30周末，高脂鼠(high fat dietinduced obesity， DIOHF)的这些指标进一步升高，但转为10周普通饮食后的高脂鼠(dietinduced obesitystandard diet， DIOSD)，虽然体重依然高于对照鼠，但血压、内脏脂肪重量和血脂水平明显降低，和对照鼠相似(图1)。

2.2 高脂饮食对Pin引起的血管舒张反应的影响 Pin可浓度依赖性地引起血管舒张反应，这种反应可被格列苯脲(10-5mol/L)抑制。Pin引起的舒张反应在DIOHF大鼠的肠系膜动脉明显降低。和对照鼠相比，DIOHF大鼠的Emax降低而EC50则升高。但是，这些变化在DIOSD大鼠中不明显，DIOSD大鼠的Emax和EC50值和对照鼠的无显著性差异。Pin引起的舒张反应在同一组大鼠的去内皮和保留内皮肠系膜动脉上无显著性差异(表1、图2)。图1 正常饮食大鼠和高脂饮食大鼠的一般特征的对比表1 高脂饮食对Pin引起的血管舒张反应的影响

2.3 高脂饮食对血管平滑肌细胞KATP电流的影响 IKATP随膜电位的上升而上升。在高K+液中，对照组，DIOSD、DIOHF大鼠的KATP电流(格列苯脲敏感性电流)分别为(-7.04±1.15)pA/pF、(-6.43±0.92)pA/pF、(-3.96±0.84)pA/pF(膜电位-60mV时)。KATP电流可被10μmol/L的Pin激活，而被10μmol/L的Glib抑制。Pin诱发的KATP电流在三组大鼠分别为(-25.21±5.07)pA/pF、(-22.30±4.28)pA/pF、(-11.87±2.31)pA/pF。这些资料表明，KATP电流在DIOHF大鼠的血管平滑肌细胞显著降低，但高脂鼠转为普通饮食后可修复这一受损电流。DIOHF与对照组或DIOSD组相比，P0.05，图3)。

3 讨

论

本研究的主要发现为肥胖可升高血压，抑制KATP介导的血管舒张反应和VSMC的KATP电流，但转为普通饮食后这些变化及升高的血压可恢复。本研究观察到的饮食对大鼠血压的变化，即高脂饮食可导致肥胖，升高血压，但转为标准饮食一段时间后，DIOSD大鼠的血压、内脏脂肪重量、血脂水平则降低。这与以往其他高脂饮食的研究结果一致[1，4]。

尽管大量证据表明高脂饮食可升高血压，但其具体机制尚不明了。其中血管阻力的增加是高脂饮食升高血压的一个重要途径。肥胖可引起一系列代谢紊乱、交感神经兴奋、脂肪因子分泌异常，这些都与血管张力升高有关。血管张力是大动脉、小动脉及微血管动脉壁上的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell， VSMC)的一种收缩活动。它是血液流经循环系统过程中受到阻力的主要决定因素之一。因此，血管张力在血压调节及血液在各组织、器官间及组织、器官内分配的调节中起着重要作用。VSMC收缩活动的调节受到来自循环血液中的激素、神经递质、内源性因子及血流动力学(切应力及跨壁压)变化等几个因素的复杂的交互作用。VSMC整合这些信号以确定其收缩装置的活动，并进一步影响着血管的阻力和血压。在此过程中离子通道起着核心作用。与所有肌细胞一样，VSMC通过Ca2+启动收缩装置。细胞膜上离子通道的Ca2+内流及内储Ca2+的释放是细胞内Ca2+的主要来源。另外，通过离子通道的离子运动在很大程度上决定着膜电位。膜电位及胞浆内的Ca2+浓度共同调节并控制着通过离子通道的Ca2+内流、Ca2+释放剂收缩装置对Ca2+的敏感性。

血管平滑肌的KATP通道是调节细胞内Ca2+浓度的一个重要通道，KATP通道开放可使细胞膜电位超极化，从而抑制电压依赖性Ca2+通道，减少Ca2+内流，舒张血管。虽然在生理条件下，KATP通道处于低开放状态，但许多血管活性因子，如血管紧张素II 、生长素，是通过调节KATP通道电流而发挥作用的。大量的研究证明VSMC KATP通道功能降低可升高血压[56]。本研究观察到KATP通道电流及其介导的血管舒张反应在高脂鼠中(DIOHF)明显降低。去除动脉内皮不影响Pin引起的血管舒张反应，这与以往的研究结果一致，表明主要是血管平滑肌中的KATP通道在KATP通道调节动脉张力中发挥作用。本研究系首次检测肥胖对血管平滑肌KATP通道功能的影响。但是，以往研究发现细胞外高糖可抑制β细胞和脑神经元的KATP通道功能[23，7]，这些相关研究支持我们的结果，同时也提示了肥胖影响KATP通道的途径。图3 高脂饮食对大鼠血管平滑肌细胞KATP电流的影响当高脂鼠转为普通饮食后，受损的KATP通道功能修复，升高的血压也下降。尽管高脂饮食影响血压的机制是复杂的，但我们的实验资料表明，高脂饮食可引起血管平滑肌KATP通道功能的可逆性降低。这可能是高脂饮食影响血压的机制之一。除此而外，这个结果还表明了低脂饮食的益处。

肥胖损伤血管平滑肌功能的具体机制还不清楚。综合以往的研究发现和本研究的结果，推测可能和以下因素有关。肥胖可使游离脂肪酸浓度升高，而游离脂肪酸可激活蛋白激酶C(protein kinase C， PKC)信号转导途径，PKC是KATP通道的重要上游调节因子[89]。高脂饮食还可损伤内皮[4]，抑制NO(nitrogen oxide)的合成。NO可以通过cGMP信号途径调节KATP通道。还有研究证实细胞外高糖可抑制KATP通道功能。近来还发现炎症因子可改变大鼠结肠平滑肌细胞KATP通道的功能和表达[10]。现在的研究已证实肥胖是一种低炎症状态[11]，脂肪组织可分泌大量炎症因子。那么，这些因子是否对血管平滑肌的KATP通道有影响值得进一步的研究。

总之，本研究的结果表明，高脂饮食可逆性地损伤了血管平滑肌的KATP通道功能，这可能是肥胖升高血压的一条潜在途径。

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